检验职称

夫志当存高远,只要坚持、努力,胜利就会属于你!“免疫印迹法”是检验职称考试需要掌握的知识,那“免疫印迹法的检测原理”是什么呢?以下是医学教育网小编为大家整理得“免疫印迹法的检测原理”相关知识,希望有助于大家备考!祝大家考试顺利,取得好成绩!

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免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术,它将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。

第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。

抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量越小,泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带)。

第二阶段为电转移。

此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。

第三阶段为酶免疫定位。

将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后,加入能形成不溶性显色物的酶反应底物,使区带染色。常用的HRP底物为3,3-二氨基联苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈蓝紫色)。阳性反应的条带清晰可辨。并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准,确定各组分的分子量。

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